病理学部分（6版教材 P248—263）

      （二）类风湿性关节炎

    类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis）是以多发性和对称性增生性滑膜炎为主要表现的慢性全身性自身免疫性疾病。由于炎症的加剧和缓解反复交替进行，引起关节软骨和关节囊的破坏，最终导致关节强直畸形。本病发病年龄多在25一55岁之间，也可见于儿童。女性发病率比男性高3一5倍。绝大多数患者血浆中有类风湿因子（rheumatoid factor，RF）及其兔疫复合物存在。

    1．病理变化

    （1）关节病变
    最常发生病变的关节是手、足小关节，其次肘、腕、膝、踩、髓及脊椎等也可被累及，多为多发性及对称性。组织学上，受累关节表现为慢性滑膜炎：①滑膜细胞增生肥大，呈多层，有时可形成绒毛状突起；②滑膜下结缔组织多量淋巴细胞、巨噬细胞和浆细胞
浸润，常形成淋巴滤泡；③血管新生明显，其内皮细胞可表达高水平粘附分子；④处于高度血管化、炎细胞浸润、增生状态的滑膜覆盖于关节软骨表面形成血管黯（pannus）。随着血管翳逐渐向心性伸展和覆盖整个关节软骨表面，关节软骨严重破坏，最终血管黯充满关节腔，发生 纤维化和钙化引起永久性关节强直。
    （2）关节以外的病变
    由于类风湿性关节炎是一种全身性疾病，因此多种器官组织可被累及。类风湿小结（rheumatoid nodule)主要发生于皮肤，其次为肺、脾、心包、大动脉和心瓣膜，具有一定特征性。镜卜，小结中央为大片纤维素样坏死，周围有细胞核呈栅状或放射状
排列的上皮样细胞，在外围为肉芽组织。有I/4患者可出现类风湿皮下结节。动脉可发生急性坏死性动脉炎。累及浆膜可导致胸膜炎或心包炎。

     2．病因和发病机制

    本病的病因及发病机制尚不清楚，可能与遗传因素、免疫因素及感染因素有关。研究结果表明，滑膜病变中浸润的淋巴细胞大部分是活化的CD4+T工，细胞。而CD4+TH细胞可分泌多种细胞因子和生长因子，从而激活其他免疫细胞（B细胞，其他T细胞）和巨噬细胞，后者可分泌一些炎症介质和组织降解因子。此外，IL-1和TGF-p可引起滑膜细胞和成纤维细胞增殖，刺激滑膜细胞和软骨细胞分泌蛋白水解酶和基质降解酶，导致滑膜和关节软骨的破坏。
    虽然细胞免疫在类风湿性关节炎中发挥主要作用，但有许多证据表明体液兔疫也参与其病变的发生。近80%患者存在IgG分子Fc片段的自身抗体，即类风湿因户，其可存在于血清或滑膜液中。血清中RF最主要的成分是IgM,亦有IgG. IgA和IgE等。RF的出现及滴度高低与疾病的严重程度一致，因而可作为临床诊断及预后判断的重要指标。血循环中的RF在本病发生中的意义尚不确定，但存在于关节的RF被认为是导致炎症反应的原因。滑膜液中IgG型RF（IgG一抗IgG）可形成免疫复合物，固定并激活补体，吸引中性粒细胞和单核细胞游出，通过m型变态反应引起组织损伤。导致T细胞激活或RF形成的原因尚不清楚，推测的感染因子包括EB病毒、支原体、小DNA病毒和分枝杆菌等，但尚无确切研究结果证实。

    （三）口眼干燥综合征

    口眼干燥综合征(Sjogren's syndrome）临床上表现为眼干、口干等特征，乃唾液腺、泪腺受免疫损伤所致。本病可单独存在，也可与其他自身免疫病同时存在，后者最常见的是类风 湿性关节炎、SLE等。
    1、病理变化
    病变主要累及唾液腺和泪腺，其他外分泌腺包括鼻、咽、喉、气管、支气管及阴道腺体也可受累。受累腺体主要表现为大量淋巴细胞和浆细胞浸润，有时一可形成淋巴小结并有生发中心形成，伴腺体结构破坏。泪腺结构破坏可导致角膜上皮千燥、炎症及溃疡形成（干
燥性角膜结膜炎）。唾液腺的破坏可引起日腔粘膜干裂及溃疡形成。呼吸道受累可导致相应的鼻炎、喉炎、支气管炎和肺炎。近25％患者（尤其是抗SS-A抗体阳性的患者）可累及中枢神经系统、皮肤、肾和肌肉。’肾脏病变主要表现为间质性肾炎伴肾小管运输障碍，与SLE不同，极少发生肾小球’肾炎。
    2、发病机制
     本病发病机制不明。研究结果提示，口眼干燥综合征是以腺管上皮为靶器官的自身免疫性疾病。高Y一球蛋白血症和抗核抗体及RF的存在表明B细胞功能过度，其原因 可能是TH细胞的作用。近年来发现两种特征性抗核糖核蛋白成分的自身抗体，分别命名为抗
SS-A和抗SS-B，对本病的诊断有参考价值。原发患者HLA-DR3出现频率增加，而伴有类风湿性关节炎的患者与HLA-DR4相关，提示原发及继发性干燥综合征的发病机制不同。

    （四）多发性肌炎

    多发性肌炎(polymyositis )罕见，是以肌肉损伤和炎症反应为特征的自身免疫病。可单独发生，或伴发其他自身免疫病，如硬皮病等。临床表现主要为肌肉无力，常为双侧对称，往往起始于躯干、颈部和四肢的肌肉。组织学上，主要表现为淋巴细胞浸润及肌纤维的变性和再生。本病的发生可能是由细胞毒性T细胞所介导。大多数患者有抗核抗体存在，其中抗t-RNA合成酶的JO-1抗体具有特异性。

    （五）硬皮病

     硬皮病（scleroderma )以全身多个器官间质纤维化和炎症性改变为特征。虽近95%的患者均有皮肤受累的表现，但横纹肌及多个器官（消化道、肺、肾和心等）受累是本病主一要损害所在，病变严重者可导致器官功能衰竭，危及生命，因而近来往往用更确切的名称一系统性硬化 症（systemic sclerosis）来取代硬皮病。本病可发生于任何年龄，但以30一50岁多见，男女 之比为1：30按其临床表现可分为两类：①弥漫性硬皮病，以广泛皮肤病变伴早期、快速进行性内脏受累为特征；②限制性硬皮病，皮肤病变相对局限，常仅累及手指和面部。内脏损伤出现晚，因此往往呈良吐经过。
    1、病因和发病机制
     本病病因不明。维化是本病的特征性病变，其启动可能与免疫系统激活、血管损伤及成纤维细胞活化有关。但三者之间的关系及相互作用机制尚不清楚。研究结果提示其过程可能是：识另11某一与本病相关的CD4+T细胞在皮肤内积聚并释放细胞因子，从而
激活肥大细胞和巨噬细胞，后者活化后可释放能激活纤维细胞的细胞因子和生长囚子，如IL-1、PDGF和FGF等，最终导致纤维化。
    高丙种球蛋白血症和抗核抗体的出现表明B细胞活化过度，两种自身抗体对本病具有相对特异性，一为抗DNA拓扑异构酶-1（DNA topoisomerase I）抗体（Scl -70），存在于70%－75%弥漫性硬皮病患者，而其他胶原病患者此抗体阳性率低于1%;另一为抗着丝点抗体，存在于60％一80％限制性硬皮病患者。有些学者认为，B细胞的活化与纤维化无关。
    硬皮病早期即可出现微血管病变。临床观察发现，100%的硬皮病患者指小动脉出现纤维化，可能由于内皮损伤的反复发生伴血小板凝集导致血小板源性生长因子的释放（如PDGF,TGF-β，引起管壁纤维化。其结果可造成管腔狭窄，从而导致组织缺氧而引起纤维化。

     2．病理变化

    （1）皮肤
    病变由指端开始，向心性发展，累及前臂、肩、颈、面部。镜下，疾病早期仅表现为真皮水肿，血管周围CD4+T细胞浸润。随着病变的发展，真皮中胶原纤维明显增加，表皮萎缩变平，附属器萎缩消失，真皮内小血管壁增厚、玻璃样变（图10-2）。有时可出现局灶性或弥漫性皮下组织钙化，尤其是限制性硬皮病患者更易发生钙化（calcification），并可出现雷诺现象（Raynaud's phenomenon）、食管蠕动障碍 （esophageal dysmotility）、手指硬皮病（sclerodactyly）和毛细血管扩 张（telangiectasia），即CREST综合征。晚期手指细而呈爪状，关节活动受限，有时指端坏死甚至脱落。面部无表情呈假面具状。
   （2）消化道
     约80%患者消化道受累，主要表现为管壁进行性萎缩和纤维化，伴血管周围淋巴细胞浸润，小血管壁进行性增厚。
   （3）肾
    叶间小动脉病变最为突出，表现为内膜粘液样变性，伴内皮细胞增生及随后的管壁纤维化，引起管腔明显狭窄，部分病例伴有细动脉纤维素样坏死。约50%患者死于肾功能衰竭。
   （4）肺
    可出现弥漫性间质纤维化，肺泡扩张、肺泡隔断裂，形成囊样空腔，本病是造成蜂窝肺的重要原因之一。
    此外，关节和骨骼肌也可受累，导致关节周围结缔组织硬化和肌肉萎缩。

病理学部分（6版教材 P248—263）

      因5版教材删除了《免疫病理》一章，但每年的考试大纲仍然有《免疫病理》方面的内容，故将6版教材《免疫病理》一章的内容介绍如下。
    免疫反应是机体在进化过程中所获得的“识别自己、排除异己”的一种重要生理功能。在正常情况下，免疫系统通过细胞和体液免疫机制以抵抗外界人侵的病原生物、维持自身产！理平衡，以及消除突变细胞，起到保护机体的作用。但免疫反应异常，无论是反应过高或过低均能引起组织损害，导致疾病。本章着重叙述常见的儿种自身免疫性疾病、免疫缺陷病，以及器管和骨髓移植排斥反应的发生机制及病理变化。
                          
                                                           第一节 自身免疫性疾病

    自身免疫性疾病（autoimmune disease）是指由机体自身产生的抗体或致敏淋巴细胞破坏、损伤自身的组织和细胞成分，导致组织损害和器官功能障碍的原发性免疫性疾病。值得提出的是，自身抗体的存在与自身免疫性疾病并非两个等同的概念，自身抗体可存在于无自身免疫性疾病的正常人特别是老年人，如抗甲状腺球蛋白、胃壁细胞、细胞核DNA的抗体等。此外，受损或抗原性发生变化的组织可激发自身抗体的产生，如心肌梗死后，机体能产生相应的抗心肌自身抗体，但此抗体并无致病作用，是一种继发性自身免疫反应。因此，要确定自身免疫性疾病的存在一般需要根据：①有自身免疫反应的存在；②排除继发性免疫反应的可能；③排除其他病因的存在。

    一、自身免疫性疾病的发病机制    

    免疫耐受性的终止和破坏是自身免疫病发生的根本机制。确切原因尚未完全阐明，可能与下列因素有关。  
 
    （一）免疫耐受（immune tolerance）的丢失及隐蔽抗原的暴露
    通常机体对自身抗原是耐受的，即自身耐受（self tolerance）状态。免疫耐受的机制十分复杂，根据T、B细胞的成熟程度不同，接触的自身抗原的量不同，可通过卜述不同机制而获得耐受状态：①克隆消除（clonal deletion），未成熟或成熟的T, B细胞在中枢或
外周兔疫器官中接触自身抗原，诱导自身反应性细胞克隆死亡并被除去；②克隆无变应性（clonal anergy），在某些情况下，T, B细胞虽然仍有与抗原反应的T细胞受体或膜免疫球蛋白表达，但对该抗原递呈功能上呈无应答或低应答状态；③T细胞外周抑制(peripheral suppression by T cell），抑制性T细胞抑制其他自身反应性T细胞的功能。下列情况可导致失耐受：
    1、回避TH细胞的耐受
    许多自身抗原属于一种半抗原和载体的复合体，其中B细胞识别的是半抗原的决定簇，T细胞识别的是载体的决定簇，引起免疫应答时二种信号缺一不可，机体对这类抗原的耐受往往出现在相应T细胞处于克隆消除或克隆无变应状态。下述情况可导致免疫应答的发生：①分子修饰：如果自身抗原被T细胞识别的载体部分经过修饰，改变其构造，则可被TH细胞克隆作为外来抗原识别，而具有对该抗原发生反应潜能的B细胞一旦 获得TH细胞的信号，就会分化、增殖，产生大量的自身抗体。这种情况可发生在药物或微生物作用下，如使用某些药物所导致的自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolyticanemia );②协同刺激分f（costimulatory molecule)表达：抗原特异性T细胞的激活需同时识别表达于抗原呈递细胞的两类分户，即主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex, MHC)和协同刺激分子（如B7-1 和B7-2) o当T细胞暴露于只表达自身抗原的体细胞时，表现为无反应状态。感染等可激活巨噬细胞表达协同刺激分子，同时呈递自身抗原，从而导致自身反应性T细胞活化。
    2、交叉免疫反应
    与机体某些组织抗原成分相同的外来抗原称为共同抗原。由共同抗原刺激机体产生的共同抗体，可与相应组织发生交叉免疫反应，引起免疫损伤。例如A组B型溶血性链球菌细胞壁的M蛋白与人体心肌纤维的肌膜有共同抗原，链球菌感染后，抗链球菌抗体可与心肌纤维发生交叉反应，引起损害，导致风湿性心肌炎。
    3、 TS细胞和TH细胞功能失衡
    Ts细胞和TH细胞对自身反应性B细胞的调控作用十分重要，当Ts细胞功能过低或TH细胞功能过度时，则可有多量白身抗体形成。系统性红斑狼疮 （systemic lupus erythematosus, SLE）小鼠模型的研究验证了这一结论。
    4、隐蔽抗原(sequestered antigen)释放
    有些器官组织的抗原成分从胚胎期开始就与免疫系统隔离，成为隐蔽抗原，机体对这些组织、细胞的抗原成分无免疫耐受性。一旦由于外伤、 感染或其他原因使隐蔽抗原释放，则可发生自身免疫反应。例如一侧眼球外伤后，可导致双侧 眼球发生交感性眼炎（sympathetic ophthalmitis）。

    （二）遗传因素

    自身免疫性疾病的易感性与遗传因素密切相关，下列事实可说明这一情况：①一些自身免疫病如系统性红斑狼疮，自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺炎等均具有家族史；②有些自身免疫病与HLA,特别是B类抗原相关。例如系统性红斑狼疮与DR- DR,,类风湿性关节炎与DR,, DR4,自身免疫性甲状腺炎与DR,有关；③在转基因大鼠可诱发自身免疫病。例如人类强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis）与HLA-B27关系密切，将HLA-B27基因转至大鼠，可导致转基因大鼠发生强直性脊柱炎。HLA基因在白身免疫中的确切作用尚末完全清楚。其机制可能是HLA-Ⅱ类基因影响自身抗原向T细胞的呈递过程。值得提出的是，HLA以 外的基因也与自身免疫病的易感性有关，其机制尚不清楚。

    （三）微生物因素

    各种微生物，包括细菌、支原体和病毒可导致自身免疫病的发生。其方式包括：①在微生物作用下自身抗原决定簇发生改变，或微生物抗原与组织的抗原结合形成复合抗原，从而回避TH细胞的耐受；②某些病毒（如EB病毒）和细菌产物可激活非特异性多克隆B细胞，从而产生自身抗体；③导致Ts细胞功能丧失；④存在自身抗原。
    此外，自身免疫性疾病多见于女性，提示女性激素一可能对某些自身免疫性疾病有促发作用。

    二、自身免疫性疾病的类型

    自身免疫性疾病可分为器官或细胞特异性和系统性自身免疫性疾病（表10-1)两种类型。 前者的病理损害和功能障碍仅限于抗体或致敏淋巴细胞所针对的某一器官或某一类细胞。后者的自身抗原为多器官、组织的共有成分，例如细胞核、线粒体等，故能引起多器官组织的损害。因其病变主要出现在多种器官的结缔组织或血管内，又称之为胶原病或结缔组织病。本节一简述几种常见的系统性自身免疫病，其他参见有关章节相应的内容。

外科学部分（6版教材 P7—16）

   2．聚合酶链反应（即polymerase chain reaction，PCR)

   （1）原理
    PCR是模板DNA,引物和四种脱氧核糖核昔三磷酸(dNTP )在DNA聚合酶作用下发生酶促聚合反应，扩增出所需目的DNA。包括三个基本步骤：双链DNA模板加热变性成单链（变性）；在低温下引物与单链DNA互补配对（退火）；在适宜温度下TapDNA聚合酶催化引物沿着模板DNA延伸。

   （2）PCR引物
    PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性，引物设计决定PCR反应的成败。由于致病基因是在正常基因序列中发生点突变、片段插人和（或）缺失，基因两翼的DNA序列和正常基因仍然相同，因此根据基因两翼的DNA序列可设计出各20个碱基左右的一对引物。

    （3）常用PCR技术
    利用PCR技术，在适当条件下扩增目的基因，然后分析PCR产物，便可判断其是否为致病基因及其变异性质。PCR技术具有快速、灵敏、特异性高等特点，为扩大其应用范围，根据需要目前已衍行和发展出以下方法：①常规PCR；②复合PCR；③反转录PCR (RT-PCR）；④原位PCR；⑤反向PCR；⑥膜结合PCR；⑦彩色PCR；⑧定量PCR；⑨固着PCR；⑩免疫PCR。

    3、生物芯片技术

    是近年发展起来的分子生物学与微电子技术相结合的核酸分析检测技术。最初的生物芯片技术主要目标是用于DNA序列测定、基因表达谱鉴定和基因突变体检测和分析，所以又称为DNA芯片或基因芯片技术。由于目前这一技术已扩展至免疫反应、受体结合等非核酸领域，出现了蛋白质芯片、免疫芯片、细胞芯片、组织芯片等，所以改称生物芯片技术更符合发展趋势。
    DNA芯片技术的基本原理是将cDNA或寡核昔酸探针以10＾5 ~ 10＾6位点／cm2的密度结合在固相支持物（即芯片）上，每个位点上的cDNA或寡核昔酸探针的顺序是已知的，将该探针与荧光标记的待测样品DNA,RNA或cDNA在芯片上进行杂交，然后用激光共聚焦显微镜对芯片进行扫描，并配合计算机系统对杂交信号作出比较和检测，从而迅速得出所需的信息。由于它携带信息量大、体积小、分析过程自动化、分析过程快及所需样品和试剂量少，因而具有广泛的应用前景、迄今能在临床L用于疾病诊断的芯片主要见于传染性疾病，如丙型肝炎、乙型肝炎及艾滋病等少数几种疾病病毒检测芯片。如果将该技术广泛用于疾病诊断，目前仍存在较大困难。原因在于当前对基因功能的认识仍不充分，而且疾病的发生与很多因素有关，要从大量基因库中筛选出疾病相关的特异性基因制成芯片，难度相当大。

    （二）肿瘤标志物检测

    肿瘤标志物是指肿瘤细胞和组织由于相关基因或异常结构的相关基因的表达所产生的蛋白质和生物活性物质，在正常组织中不产生或产量甚微，而在肿瘤病人组织、体液和排泄物中可检测到。此外，在病人机体中，由于肿瘤组织浸润正常组织，引起机体免疫功能和代谢异常，产生一些生物活性物质和因子，虽然这些物质和因子特异性低，但与肿瘤发生和发展有关，也可用于肿瘤辅助诊断。

    1．肿瘤标志物的测定方法

    （1）生物化学技术
    用于测定由肿瘤细胞产生并分泌到体液中的肿瘤标志物，因其含量与肿瘤活动度有关，所以适用于绝大多数肿瘤病人的监测、疗效和预后观察。

    （2）免疫组化技术
    可从形态学上详细了解细胞分化、增殖和功能变化的情况，有助于确定肿瘤组织类型、预后和临床特征的分析。

    （3）单克隆抗体技术
    临床上已用于甲胎蛋白(AFP )、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原 (PSA）、CAl9-9、CA125、CA50等肿瘤相关抗原的检测。

    2．肿瘤标志物分类

    （l）原位性肿瘤相关物质
    在同类正常细胞含量甚微，而当细胞癌变时迅速增加，如各种癌细胞内的酶。

   （2）异位性肿瘤相关物质
   是由恶变的肿瘤细胞产生，不是同类正常细胞的组分，如异位性激素、在肺癌时促肾上腺皮质激素（ACTH）明显升高。

   （3）胎盘和胎儿性肿瘤相关物质：
    癌细胞的特点是无限增殖，并向周围组织侵袭和转移，甚至向远隔组织转移，而胎盘绒毛细胞和胎儿组织细胞也有这样的特点。当胎儿成长后，有一些物质就消失，如果成人组织细胞发生癌变，这类胎盘性或胚胎性物质就会产生或表达癌胚性物质，如AFP、CEA；癌胎盘性物质，如hCG（人绒毛膜促性腺激素）等。

   （4）病毒性肿瘤相关物质：
    凡能在人或动物引起肿瘤或细胞恶性转化的病毒，均称为肿瘤病毒。与肿瘤有关的病毒有HTL-1病毒（成人T细胞白血病）、EB病毒（Burkitt淋巴肉瘤）、HS病毒（宫颈癌与皮肤癌）、HB病毒（肝癌）和人巨细胞病毒等。

    （5）癌基因、抑癌基因及其产物：
    各种致癌因素诱发基因激活和抑癌基因失活及其表达产物异常，是肿瘤发生、发展的重要标志。
    需要指出的是，同一肿瘤可含有多种肿瘤标志物，而不同肿瘤或同种肿瘤的不同组织类型除有共同的标志物外，也可有不同的特异性标志物，即某一肿瘤的标志物对另一肿瘤来说不一定是标志物，而某一组织的正常产物对另一组织来源的肿瘤却可成为较好的肿瘤标志物。
    检测肿瘤标志物的临床意义在于：早期发现或诊断原发肿瘤；筛查肿瘤高危人群；鉴别肿瘤的良、恶性；判断肿瘤的发展过程；观察肿瘤的治疗效果；预测肿瘤的复发和预后。

      第三节     生物治疗

    外科学发展到今天已经能够有效地救治损伤和感染性疾病，但对于发病率日渐增高、严重威胁人类生命的肿瘤性疾病的复发与转移还力不从心；同时又面对诸如组织异常性增生、器官移植后的排斥反应、器官移植供体不足等难题。在分子生物学理论和技术基础上发展起来的基因治疗和生物学应答调节剂疗法，为解决上述难题带来了希望，目前作为外科、内科等经典疗法的辅助手段，显示出无限生机。

    （一）基因治疗

    1、基本概念

    基因治疗是用正常或野生型基因的导人，校正或置换致病基因，以期纠正基因功能异常的一种治疗方法。狭义的基因治疗是指目的基因导入靶细胞后，与宿主细胞内的基因发生整合成为宿主基因组的一部分，或不与宿主细胞内的基因整合而位于染色体外，但都能在细胞中得到表达，其表达产物起到治疗疾病的作用。而广义基因治疗则指凡是采用分子生物学原理和方法在核酸水平上开展的疾病治疗方法。

    2、基本条件

    只有满足下列条件的疾病才考虑基因治疗：①现行的各种治疗方法无效或疗效不佳；②已经在DNA水平上明确其发病机制；③已经克隆出有关基因；④该基因可以在体外进行操作；⑤只需低水平表达即可治愈或改善疾病；⑥表达水平不需要严格限制。

    3、基本步骤

    主要包括目的基因的获得、靶细胞的选择以及有效、安全的基因载体及转移方法。

    （1）目的基因的获得
    为进行基因治疗，首先必须获得目的基因，并对其表达调控进行详细研究。获得目的基因的方法主要有：①真核基因组DNA文库中目的基因的克隆；②cDNA文库中目的基因的克隆；③人工合成基因片段；④PCR扩增目的基因等。

    （2）靶细胞的选择
    基因治疗研究中可供选择的靶细胞有生殖细胞和体细胞两大类，目前人类基因治疗研究主要限于体细胞。因为生殖细胞基因治疗，由于受目前研究水平和伦理道德的影响而在全世界受到严格禁止。用体细胞进行基因治疗有两种途径：一是直接基因治疗，即将目的基因在体内直接转移到靶细胞，所用载体必须具有特异的导向性和对靶细胞具有足够高的转移效率；二是间接基因治疗，即先从病人体内取出某一器官组织的细胞，体外扩增后，将目的基因转人靶细胞形成表达外源基因的遗传修饰细胞，选择高表达的细胞扩增培养，以一定数量移植于病人体内。目前间接基因治疗作为基因治疗的主要途径，对靶细胞的选择标准是：①容易取出和移植；②容易体外培养；③外源目的基因能高效导人靶细胞；④具有较长寿命。目前最常用的靶细胞主要有淋巴细胞、树突样细胞、骨髓干细胞、皮肤成纤维细胞、骨骼肌细胞、血管内皮细胞、呼吸道上皮细胞。此外，在肿瘤细胞基因治疗中，肿瘤细胞本身成为基因转移的靶细胞，通过产生自体瘤苗来达到治疗和预防肿瘤的目的。

    （3）基因转移方法
    有效的基因治疗与如何将外源基因转移到细胞内并进行有效的表达是分不开的，目前实现体外基因转移的间接转移方法很多，概括起来可分为：①化学法：如磷酸钙沉淀法，DEAF一葡聚糖法。②物理法：如显微注射法，电穿孔法，颗粒轰击（基因枪）法。③膜融合法：如脂质体法。上述三种基因转移方法虽各有优点，但均由于存在基因转移率低及较难获得稳定表达的细胞等缺点，从而使其在基因治疗中的实际应用受到限制。④病毒载体基因转移法：为目前基因治疗实验研究的主要方法，反转录病毒载体是在增殖细胞中进行基因转移最常用的载体，而在非增殖细胞的基因转移中则以腺病毒或腺相关病毒等载体为常用。体内直接基因治疗还需要解决载体及其安全性问题。目前基因治疗在临床应用尚待基础与应用性研究的深人研究，是肿瘤治疗重要的发展方向。

    （二）生物学应答调节剂疗法

    生物学应答调节剂（biological response modifier, BRM）是指来自生物体自身的一些细胞和分子，既是机体对内、外环境刺激应答的效应因子，也是维持机体内环境稳定的重要因素。应用BRM，以调动机体固有能力抵御疾病的疗法，已被纳人生物治疗范畴。BRM主要有以下四种：

    1．细胞因子（cytokines）

    是指一类由免疫细胞（淋巴细胞、单核一巨噬细胞等）和相关细胞（纤维母细胞、内皮细胞等）产生的、具有调节细胞功能的、高活性、多功能的多肤。生物效应的特点是微量高效，在体内各种细胞因子的作用构成复杂的网络关系，常以自分泌(autocrine)或旁分泌（paracrine）方式局部发挥免疫调节作用。目前与肿瘤生物治疗有关的细胞因子有五类：①干扰素（interferon，IFN）：IFN-a, IFN-俘、IFN-了；②白细胞介素（interleukin，IL）：正式报道的已有18种（IL-1一18）；③肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）：TNF-a, TNF-β；④集落刺激因子(colony stimulating factor,CSF）：G-GSF, M-CSF, GM-CSF , Multi-CSF（即IL-3）：⑤转化生长因子（transforming growth factor，TGF）：TGF-α。、TGF-β等。

    2．过继细胞免疫治疗（adoptive cellular immunotherapy，ACI）

    通过给肿瘤病人输注具有抗肿瘤作用的免疫效应细胞，使受体获得或增强抗肿瘤应答反应。主要的免疫效应细胞有：淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）、肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）、CD3单抗激活的杀伤细胞(CD3AK）、细胞毒性T细胞（Tc）、自然杀伤细胞（NK细胞）、单核一巨噬细胞（M4）、树突状抗原提呈细胞（DC细胞）等，目前已经用于临床的主要是LAK细胞、TIL和DC细胞。

    3．单克隆抗体及其偶联物

    单克隆抗体是杂交瘤分泌的抗体，具有高度特异性和专一性，用于肿瘤治疗有两种方法：①单独使用单克隆抗体，通过激活补体依赖的细胞毒作用（CDC）或抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC）杀伤肿瘤细胞；②用单克隆抗体与其偶联物进行免疫导向治疗，即所谓的“生物导弹”疗法：通过以单克隆抗体为特异性导向的载体，将与其偶联（或结合）的非特异性的放射性核素、抗癌药物、毒素（物）、酶和其他类型的生物制剂“携带”至肿瘤部位，发挥相应的抗肿瘤效应。

    4．肿瘤疫苗（cancer vaccine）

    肿瘤疫苗抗癌的基本原理是：通过体外分离、提取肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原，制备不同形式的疫苗注射到肿瘤或肿瘤病人体内，由抗原提呈细胞摄取并呈递给免疫细胞，使机体T淋巴细胞致敏、活化，生成肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞，专一性地结合并杀伤肿瘤细胞。
     由于BRM研究，特别是生物技术的快速进展，目前的生物治疗概念已扩展为“任何生物学物质(biological substance）或生物制剂（biologicals）的治疗性应用”。比如用免疫组织（胸腺、脾、淋巴结）和外周淋巴细胞制备的免疫增强剂胸腺素（thymosins)、转移因子（transfer factor, TF)和免疫核糖核酸，具有促进T细胞分化成熟、增强了细胞对抗原的应答反应、增强CTI和NK细胞活性的作用，对T细胞免疫功能低下病人的免疫功能恢复、协助宿主抗病毒感染和抗肿瘤都有积极作用。